一、改良的鄰甲苯胺硼酸法 (O-TB 法 )

要 求

1．了解血糖微量測定的基本原量。

2．掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。

3．復習血糖的來源、去路及其調節的有關理論知識。

原 理

葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成一綠青色的化合物，其顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量正成比，與進行同樣處理的標準葡萄糖液相比較可求出樣品中葡萄糖的含量。

正常血糖水平為80~120毫克/100ml，在糖尿病及腎上腺皮質機能亢進和腦下垂體機能亢進的患者血中葡萄糖含量可顯著升高，饑餓時，血糖水平可下降。

試 劑

1．O-TB試劑

2．葡萄糖標準液(1.0毫克/毫升)。

器 材

1．硬質中試管 三支。

2．刻度吸管 ：0.1毫升三支；5毫升一支。

操 作

取硬質中試管 三支，分別標以1、2、3號，按下表操作：混勻后同時將三支試管置于100℃水浴 中，如熱5~6分鐘后，取出用冷水冷卻，在30分鐘內用722型分光光度計 在620nm比色。以空白管調零，分別測得A_樣 和A_標 。

計 算

每100毫升血漿中葡萄糖含量(毫克)

= ×０.１×1000= ×100

附注：如血中葡萄糖糖量過高，顏色太深，可于樣品管中加倍加入O-TB試劑，加熱冷卻后比色，并將zui后的計算結果乘2，即得每100毫升血漿中葡萄糖的含量。

試劑配制

1.O-TB試劑

冰醋酸 883.2 毫升

硫脲 1.5克

鄰甲苯胺 76.8 毫升

硫脲在冰醋酸中溶解后加鄰甲苯胺混合，再加飽和硼酸溶液40毫升。

充分混勻后放入褐色內貯存備用，一般可貯存幾個月。

附：飽和硼酸溶液：稱取硼酸6克溶于100毫升蒸餾 水中，放置一夜過濾即可應用。

2.葡萄糖標準貯存液：每毫升10.0毫克，用0.25%安息香酸溶液配制。

3.葡萄糖標準應用液：每毫升1.0毫克，用0.25%安息香酸溶液將貯存液稀釋十倍(3%三氯醋酸可代替安息香酸溶液)。

二、葡萄糖氧化酶 法

原 理

在pH7.0條件下，葡萄糖氧化酶 可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫。后者在過氧化物酶的作用下與*，4—氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質，在505nm處有zui大吸收峰，標本中葡萄糖含量與吸光度成正比，可求得血樣中葡萄糖含量。用本法測定葡萄糖具有高度特異性，因此其準確度遠比O-TB法為高，更能反映了血中葡萄糖的真實含量，是為科研工作中常用的葡萄糖測定方法。隨著試劑藥盒的推廣普及，此法也已廣泛應用于臨床檢測。其反應過程如下：

葡萄糖氧化酶

β—D葡萄糖+O₂ +H₂ O D —葡萄糖酸+H₂ O₂

過氧化物酶

H₂ O₂ +4—氨基安替吡啉+* H₂ O+ 紅色醌式物質

操 作

取硬質中試管三支，分別標以1.2.3號，按下表操作：

混勻后37℃保溫15分鐘，使用722型分光光度計 在505nm波長下比色，以空白管調零，分別測得A_樣 和A_標 。

計 算

葡萄糖含量mg/dl= ×100

100為標準液濃度值mg/dl

試 劑

葡萄糖（氧化酶法）測定試劑盒