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滅活內源性酶及封閉內源性*

時間:2013-12-26閱讀:642
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 在生物體組織內均含有一定量的內源性酶和內源性*,如富含血細胞的組織標本有大量具有活性的過氧化物酶,肝、脾、腎、腦及胚胎組織中富含*。如采用過氧化物酶檢測系統或堿性磷酸酶和NBT/BCIP顯色系統進行免疫組織化學染色時.酶的作用是催化底物,使顯色劑顯色,而組織中的內源性酶同樣也能催化底物,使其顯色,這就影響免疫組織化學染色的特異性。在使用親和素試劑的免疫 組織化學染色中,內源性*易結合親和素,形成親和素一*復合物,導致假陽性。所以在染色之前應設法將組織內的內源性酶滅活或將內源性*封閉,以保證染色的特異性。

 
    (1)滅活內源性過氧化物 酶:將組織在3%甲醇―H2 O2 (3ml純甲醇中加入30%H2 02 0.3ml,現用現配)中室溫浸泡10分鐘,繼而用PBS沖洗3次,每次5分鐘。
 
    (2)滅活堿性磷酸酶:zui常用的方法是將左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH為7.6~8.2,可除去大部分內源性堿性磷酸酶,對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶可用0.05mol/L酒石酸抑制。
 
    (3)封閉內源性*:將組織切片用0.0l%親和素溶液室溫處理10~20分鐘,使其結合位點飽和,以消除內源性*的活性。也可購買*阻斷劑試劑盒,其中A液為親和素.B液為*。使用時加A液l滴,室溫10分鐘,PBS沖洗3次,每次2分鐘;加B液1滴。室溫10分鐘.PBS沖洗3次,每次2分鐘。

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