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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
產品名稱:極小棒桿菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Corynebacterium minutissimumPCR
編號:XG-P1282
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
吲哚乙酸酯紙片20片/瓶用于空腸彎曲菌吲哚乙酸酯水解試驗
TGE培養基 TGE Medium 用于細菌總數測定
抗生素檢定培養基2號(高PH) Antibiotic Agar No.2 250 用于,等效價測定
葡萄糖肉浸液肉湯250g/瓶用于溶血性鏈球菌增菌incubationmedia葡萄糖肉浸液肉湯250g/瓶用于溶血性鏈球菌增菌
月桂基鹽蛋白胨肉湯LST管(雙料,含小導管) 10ml/支*20 用于大腸桿菌、大腸菌群的測定301 紅色釉化擔體301 red support enamelGC40-60目100g
ER0972NheI2500 units10
40140-100MLDimetxyl Dichlorosilane 二甲基二錄硅烷75-78-5100ml
Cetylpyridnium Chloride, Monohydrate500g
吐溫20100mlHA Others H4N4 甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H019人前列腺上皮細胞*培養基100mL
-EDTA(含10mL 酶解緩沖液) 1mL
Tca-8113-EGFP(CMV-EGFP慢病毒構建穩定株)人舌鱗癌細胞 Tca-8113-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS
IL13 Protein Mouse 重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白
人表皮黑色素細胞-淺色素(HEM)( 5×105 ) mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 Mouse
極小棒桿菌PCR檢測試劑盒ShigellaBroth
NTM培養基 250g 用于淋球菌的分離培養(Quelab方法)
TCBS瓊脂 Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 250 用于致病性弧菌的選擇性分離(GB、SN標準)
脫羧酶試驗培養基250g/瓶用于細菌的脫羧酶試驗incubationmedia脫羧酶試驗培養基250g/瓶用于細菌的脫羧酶試驗
卵黃多粘菌素瓊脂平板(9cm) 10個/包 用于蠟樣芽孢桿菌的固體平板計數11948MS維生素500L/瓶用于制備MS培養基incubationmedia11948MS維生素500L/瓶用于制備MS培養基 進口分裝 Jujuboside D 酸棗仁皂苷D 194851-84-8 20mg
11935木本植物用培養基(WPM) 進口分裝 Sakakin 苔酚葡萄糖苷 21082-33-7 20mg
12005改良運送培養基 進口分裝 Liensinine 蓮心堿 2586-96-1 20mg
10159Letheen肉湯基礎 進口分裝 Fraxinellone 梣 28808-62-0 20mgIgG4 Others Human 人 IgG4-Fc (108 Ser/Pro) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0095HCCC-9810(人肝內膽管癌細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肝星形細胞*培養基 100mL
H322人非小細胞肺癌細胞 H322 cells in human non small cell lung cancer DMEM+10% FBS
OSM Protein Human 重組人 Oncostatin M / OSM 蛋白 (His 標簽)
RWPE-2(人前列腺正常細胞) 5×106cells/瓶×2 CHRF(人巨核細胞白血病)
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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