人食管癌組織源成纖維細胞提取物【Human Cancer: Esophageal Cancer Fibroblast Derivatives】
人食管癌組織源成纖維細胞提取物是從人食管癌組織源成纖維細胞提取的，人食管癌組織源成纖維細胞從人食管癌組織制備。人食管癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人食管癌組織源成纖維組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司產品采用干冰運輸，經過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

DPX Mountant;弱粘煤成分分析標準物質anti- G0S2 antibody荊豆凝集素(UEA)ELISA試劑盒

DROPPER INDOLE1/3焦煤成分分析標準物質anti- G3BP1 antibody槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒

D-Serine;D-2-AMino-3-hydroxypropionic acid;D-β-Hydroxyalanine;(R)-2-AMino-3-hydroxypropionic acid;(R)-(-)-Serine;D-3-Hydroxy-α-alanine;氣煤成分分析標準物質anti- G6PC3 antibody花生凝集素(PNA)ELISA試劑盒

Sorbitol肥煤成分分析標準物質*anti- G6PD antibody大豆凝集素(SBA)ELISA試劑盒

D-Threonine;D-2-AMino-3-hydroxybutanoic acid;D-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2R,3S)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2R,3S)-(+)-Threonine磁鐵礦精礦成分分析標準物質anti- GA repeat antibody菜豆凝集素(PHA)ELISA試劑盒

D-Tryptophan;D-2-AMino-3- indolylpropanoic acid;D-β-3-Indolyl alanine;?-2-AMino-3-(3-indolyl)propionic acid;?-(+)-Tryptophan磁鐵礦精礦成分分析標準物質anti- GAA antibody扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒

D-Tyrosine;D-α-AMino-β-p-hydroxyphenyl propionic acid;D-α-AMino-p-hydroxyhydrocinnaMic acid;?-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;R(+)-Tyrosine;3-(4-Hydroxyphenyl)-D-alanine磁鐵礦精礦成分分析標準物質anti- GAB1 antibody蓖麻凝集素(RCA)ELISA試劑盒

Galactitol球團礦成分分析標準物質anti- GAB2 antibody豌豆凝集素(PSA)ELISA試劑盒

人食管癌組織源成纖維細胞提取物Zalerion maritimum (Linder) Anastasiou, ana ..葡萄糖轉運蛋白4抗體anti- VGLL4 antibody卷曲同源物4(FZD4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Streptomyces fulvoviridis (Kutschaeva et al ..脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體anti- VGLUT1 antibody卷曲同源物9(FZD9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..糖皮質激素受體抗體anti- VGLUT2 antibody卷曲同源物10(FZD10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Pseudoalteromonas aurantia (Gauthier and Br ..G蛋白偶合受體激酶1抗體anti- VHL antibody基質金屬蛋白酶17(MMP17)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saprospira grandis Gross促代謝型受體M3抗體anti- VHL antibody基質金屬蛋白酶19(MMP19)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen促代謝型受體5抗體anti- VILIP 3 antibody基質金屬蛋白酶20(MMP20)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Trichoderma parareesei Atanasova et al.生長調節(jié)致癌基因-1抗體GROaanti- VILIP-1 antibody基質金屬蛋白酶21(MMP21)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human促胃泌素釋放肽抗體anti- Villin antibody基質金屬蛋白酶24(MMP24)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)