人肺成纖維細胞提取物【Human Lung: Normal Lung Fibroblast Cells Derivatives】
人肺成纖維細胞提取物是從人原代肺成纖維細胞提取的，人原代肺成纖維細胞從正常人肺組織制備。正常人肺組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人肺成纖維組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

 培養步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。 
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

tert-dodecylthiol自吸收燈-鋇Baanti- Drebrin antibody大鼠抗抗體(AsAb)ELISA試劑盒

Solvent Red 43自吸收燈-鈹Beanti- Drebrin antibody大鼠狀旁腺激素(PTH) ELISA試劑盒

Acid Red 87自吸收燈-鉍Bianti- DRG1 antibody大鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒

NA自吸收燈-鈣Caanti- DRG2 antibody大鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒

Eosin-Methlene Blue Agar II自吸收燈-鎘Cdanti- DRIM antibody大鼠白介素15(IL-15)ELISA試劑盒

Nordihydroguaiaretic acid自吸收燈-鈰Ceanti- Drosha antibody大鼠白介素16(IL-16)ELISA試劑盒

NA自吸收燈-鈷Coanti- DRP1 antibody大鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒

Bis(trimethylsilyl)acetylene自吸收燈-鉻Cranti- DSE antibody大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒

人肺成纖維細胞提取物Homo sapiens, humanFAM134C蛋白抗體anti- THOC1 antibodyIgG-Fc片段結合蛋白(FcγBP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

frozen成纖維細胞生長因子受體底物2抗體anti- THOC2 antibody序列相似家族132成員A(FAM132A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human蛋白激酶3抗體anti- THOC5 antibody形成素結合蛋白1(FNBP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化成纖維細胞生長因子受體底物2抗體anti- THOC6 antibody肌脂蛋白(SLN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Scorpiosporium angulatum (Ingold) Iqbal, an ..酸化蛋白激酶3抗體anti- THOC7 antibodyD-多巴色素變位酶(DDT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FGFR1癌基因伴侶蛋白2抗體anti- THOP1 antibody歸巢關聯細胞黏附分子(HCAM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Ochroconis gallopavum (Cooke) de Hoog, anam ..FCHSD1蛋白抗體anti- THRA antibody鈣網蛋白(CRT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Cryptosporidium parvum TyzzerFGFR1癌基因伴侶蛋白抗體anti- THRAP3 antibody鈣腔蛋白(CALU)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)