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上海博湖生物科技有限公司
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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗包被的方式
2024-10-9 閱讀(341)
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。
包被的方式:
將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與(C8H8)n固相載體是通過物理吸附結合 的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對 不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯C2H4等固相具有較強的吸附 力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在 于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該 抗原的特異抗體作預包被，其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相 抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接 包被的另一優(yōu)點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在(C8H8)n載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗 DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將(C8H8)n板先經紫外線照射(例如30W紫外燈，75cm照射12小 時)，以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質，如聚賴氨酸作預包被，也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物su系統(tǒng)作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入生物su化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。
