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瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染主要差異點(diǎn)
2023-12-18 閱讀(496)
瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，這兩者都是將目的基因轉(zhuǎn)染至特定哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而表達(dá)得到目的蛋白。但兩種方式在原理，操作流程等方面均有所區(qū)別。
一、實(shí)驗(yàn)原理：
瞬時轉(zhuǎn)染原理：外源基因并沒有轉(zhuǎn)染到細(xì)胞的染色體上而是存在于游離的載體上,這樣可以在短時間內(nèi)獲得基因的表達(dá)產(chǎn)物，但是隨著細(xì)胞的不斷分裂增殖外源基因最終會丟失，無法繼續(xù)進(jìn)行重組蛋白的生產(chǎn)。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染原理：外源基因轉(zhuǎn)染至細(xì)胞染色體上，目的基因不會隨著細(xì)胞傳代而消失，能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建)能夠?qū)崿F(xiàn)長期、穩(wěn)定的生產(chǎn)重組蛋白。
二、操作步驟
1、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所用的質(zhì)粒是不同的，瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性，而用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選。另外，兩者所用的培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)試劑也有所區(qū)別。
2、瞬時轉(zhuǎn)染的操作比構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的操作簡單，構(gòu)建好質(zhì)粒后,經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白;而構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系需要先將構(gòu)建好的質(zhì)粒線性化，再得入培養(yǎng)好的哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，通過一定的轉(zhuǎn)染方式實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒與細(xì)胞的融合，接著經(jīng)過細(xì)胞池篩選、單克隆篩選、細(xì)胞傳代培養(yǎng)等步驟才能得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。對穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)能夠長期穩(wěn)定的生產(chǎn)目的蛋白。
三、特點(diǎn)：
瞬時轉(zhuǎn)染：能夠快速生產(chǎn)得到微量至中量的重組蛋白；實(shí)驗(yàn)成本低；一個宿主可以帶有多個拷貝，表達(dá)效率高。
穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建：能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白；得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株之后后續(xù)生產(chǎn)蛋白的成本降低；
能夠?qū)蜻M(jìn)行基因插入、基因敲除等編輯操作。
