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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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豬乙腦IgG抗體（JEV-IgG）分析試劑盒實驗原理
2018-9-26 閱讀(213)
| 提 供 商 | 上海莼試生物技術(shù)有限公司 | 資料大小 | 63.9KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 16次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 213次 |
豬乙腦IgG抗體（JEV-IgG）分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中豬乙腦 IgG抗體（JEV-IgG）原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入乙腦 IgG 抗體（JEV-IgG），再與HRP標記的抗原 ，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TB顯色。用純化的抗TB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙腦 IgG抗體（JEV-IgG）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬乙腦 IgG抗體（JEV-IgG）濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2 酶標試劑
標準品（32ng/L）
標準品稀釋液
3 酶標包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A液
6 顯色劑 B液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
2張
1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過（HRP）活性。
豬乙腦IgG抗體（JEV-IgG）分析試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16ng/L
8ng/L
4ng/L
2ng/L
1ng/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液：將 30倍濃
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜重復(fù) 5次，拍干。30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
豬乙腦IgG抗體（JEV-IgG）分析試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
