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矢車菊素-O-半乳糖苷含量測試盒?操作步驟

2022-1-18  閱讀(167)

矢車菊素-O-半乳糖苷含量測試盒操作步驟(僅供參考):  

1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩定,使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。

2.準備樣品:  

a,細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行裂解,可以采用Leagene Western及IP細胞裂解液,如果有必要需進行適當勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測。  

b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于CAT的檢測。  

c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內,顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進行CAT檢測。

d,血液中的紅細胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃3000g離心5min,棄上清,沉淀用預冷的生理鹽水洗滌3次。  

e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。

f,(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續 計算單位蛋白重量組織或細胞內的CAT含量。  

3、CAT檢測:按照下表設置空白管、自身對照管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并 注意避免產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測能設置平行孔。

4、分光光度計檢測405nm處吸光度,分光光度計比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計,亦可用酶標儀檢測,但如果有條件,盡量采用分光光度計檢測。蒸餾水調零,讀取各管吸光度值。一般應數小時內檢測完畢。

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