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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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禽副粘病毒型PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶因素
2020-6-18 閱讀(189)
禽副粘病毒型PCR檢測試劑盒產(chǎn)生非特異性條帶:
1)用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。
2)在PCR反應中，非特異的起始擴增將導致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3)由于mRNA剪切方式的不同，根據(jù)選擇引物的不同將導致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
產(chǎn)生彌散（smear）條帶
1)在PCR反應體系中一鏈產(chǎn)物的含量過高
2)減少引物的用量
3)優(yōu)化PCR反應條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4)在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時，其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴增，一般會顯示為彌散背景。
產(chǎn)生大分子量的彌散條帶
1)大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2)對于長片段的PCR，建議將反應體系中cDNA的濃度稀釋至1:10（或1:100-1:200）
6. 在無反轉(zhuǎn)錄酶的情況下，對照RNA獲得擴增結(jié)果詳細解析關(guān)于Elisa試劑盒的儲存于有效期多久
