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PCR實驗室工作中需要注意哪些問題?

時間:2020/5/20閱讀:5809
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PCR實驗室是分子診斷的基礎,也是進行PCR實驗的*場所。近些年,分子診斷行業快速發展,使得很多IVD從業者對PCR的認識又進入到了一個新的階段,但是基于實驗室的基本知識仍然是非常重要的一環。

PCR實驗室工作中的注意事項


(一)試劑儲存和準備區

貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區,不能經過擴增檢測區,試劑盒中的陽性對照品及質控品不應當保存在該區,應當保存在標本處理區。  

(二)標本制備區

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發生氣溶膠所致的污染,可通過在本區內設立正壓條件,避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,必須蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在傳染危險性的材料,必須在生物柜內開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。

(三)擴增區

為避免氣溶膠所致的污染,應當盡量減少在本區內的走動。必須注意的是,所有經過檢測的反應管不得在此區域打開。

(四)擴增產物分析區

核酸擴增后產物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法(放射性核素標記或非放射性核素標記)、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉移、核酸測序方法、質譜分析等。

本區是主要的擴增產物污染來源,因此必須注意避免通過本區的物品及工作服將擴增產物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產物時,必須使用洗板機洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實驗室內傾倒,而應當至遠離PCR實驗室的地方棄掉。

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