細胞周期與凋亡檢測試劑盒

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商品介紹：

產品原理：本產品檢測原理基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析細胞周期和凋亡。碘化丙啶是一種雙鏈DNA染料，其嵌入雙鏈DNA中可以產生熒光，并且熒光的強度和雙鏈DNA的量成正比。

在細胞周期中，G0和G1期細胞有一套染色體，G2和M期細胞有兩套染色體，S期介于兩者之間。經過碘化丙啶染色后，處在不同細胞周期中的細胞的熒光強度是不一樣的。假定G0和G1期的細胞熒光強度為1，那么G2和M期的細胞的熒光強度為2，S期的細胞介于1和2之間。

細胞凋亡時，由于細胞核皺縮和DNA片段化，染色時DNA片段會從打孔的細胞膜處丟失，流式細胞儀檢測時，熒光強度小于1，即Sub-G1峰或者凋亡細胞峰。

細胞凋亡也可以用流式細胞儀觀察細胞光散射的變化來檢測。凋亡前期，染色質皺縮，細胞密度增加，前向角光散色顯著降低。凋亡后期，細胞產生凋亡小體，前向角光散射和側向角光散色都顯著降低。

產品適用：本試劑盒可用于培養的貼壁細胞或者懸浮細胞檢測，也可用于組織細胞檢測。

保存條件：-20°避光條件下，保存1年以上，4°避光條件下，可以保存2個月。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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