北京低*  有關血清的一些常見問題 進口*

血清是細胞培養中zui重要的元素之一。因此，我們特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題，供大家參考：

1. 保存血清的方法? 
我們建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。 

2. 如何解凍血清才不會使產品質量受損? 
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。 

3. 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理? 
血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。 

若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

4. 為什么要熱滅活血清? 
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。 

5. 有必要做熱滅活嗎? 
實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。 

因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節省您寶貴的時間，更確保血清的質量! 

6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀? 
GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。 

7. 如何避免沉淀物的產生? 
我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: • 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實驗顯示非常容易產生沉淀物。 
• 解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。 
• 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。 
• 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 
• 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差別? 
Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清執行的所有的標準檢驗程序，,除了這些標準檢測，Certified胎牛血清還有一些附加的檢測： 

zui終內毒素含量的檢測
噬菌體檢驗
生物化學檢測 
激素的檢測
血紅蛋白檢測
Sf9 細胞生長促進及方法學檢測 

9. 如何評估ES細胞合格的胎牛血清? 
使用D3 ES細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。 

相關生長效率分析： 
當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養基中，檢測啟動和支持ES細胞克隆的能力。 

細胞毒分析： 
當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。 

相關形態學和分化分析： 
檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅，分化的細胞較大，豐滿，顏色較淺。 

所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行，培養基中出現ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導致的問題。（ESGRO或LIF經常用來保持ES細胞處于未分化狀態。） 

培養發現大約8批血清中有1批可以用來培養ES細胞

對外承攬試驗：免疫組化,熒光，Tunel，Elisa，WB，

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