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北京雅安達生物技術有限公司

北京低* 小鼠神經肽Y(NPY)酶聯免疫分析試劑盒 說明書

時間:2013-4-24閱讀:400
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 北京低* 小鼠神經肽Y(NPY)酶聯免疫分析試劑盒 說明書

本試劑盒僅供研究使用

 

 

檢測范圍:78 pg/ml - 5000 pg/ml
zui低檢測限:19.5 pg/ml
特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的小鼠NPY,且與其他相關蛋白無交叉反應。
有效期:6個月
預期應用:ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中NPY含量。
說明 
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。 
3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。
4.剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正常現象,不會對實驗結果造成任何影響。
概述
神經肽Y(NPY)是由36個氨基酸殘基組成的神經活性肽,屬胰多肽家族,廣泛分布于哺乳動物中樞和外周神經系統,是含量zui豐富的神經肽之一。NPY的生物學作用極為復雜,除與學習、記憶、驚厥、疼痛、攝食等有關外(北京雅安達生物技術有限公司),與應激的關系也十分密切,在中樞作為抗焦慮的神經調節因子,在外周則存在于交感神經內(在某些動物種屬中還存在于血小板),具有收縮血管的功能,還可作用于血管使其增生。
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗NPY抗體的微孔中依次加入標本或標準品、*化的抗NPY抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NPY呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。 
試劑盒組成及試劑配制 
1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔)。 
2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. *標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. *標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
標本的采集及保存 
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,(北京雅安達生物技術有限公司)但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為5000 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋5000 pg/ml,2500 pg/ml,1250 pg/ml,625 pg/ml,312 pg/ml,156 pg/ml,78 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。
如配制2500 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)5000 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
*標記抗體的稀釋原則:
臨用前以*標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl*標記抗體加990μl*標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl)(北京雅安達生物技術有限公司),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
操作步驟
實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

對外承攬試驗:免疫組化,熒光,TunelElisaWB

原位雜交,比色法,HE染色,特染,圖像分析,!

    (北京雅安達生物技術有限公司)

 

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