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上海哈靈生物科技有限公司

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大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA操作說明書

2013-7-29  閱讀(931)

提 供 商 上海哈靈生物科技有限公司 資料大小 31.5KB
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資料類型 WORD 文檔 瀏覽次數(shù) 931次
【詳細說明】
大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 48T
3μg/ml -120μg/ml
使用目的
本試劑盒用于測定大鼠肝細胞及相關(guān)液體樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)含量。
 
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)水平。用純化的大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入極低密度脂蛋白(VLDL),再與HRP 標記的極低密度脂蛋白(VLDL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的極低密度脂蛋白(VLDL)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)濃度。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 20ml× 終止液 3ml×
酶標試劑 3ml× 標準品(240μg/ml 0.5ml×
酶標包被板 12 孔× 標準品稀釋液 1.5ml×
樣品稀釋液 3ml× 10 說明書 
顯色劑 3ml× 11 封板膜 
顯色劑 3ml×1/ 12 密封袋 
 
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120μg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
60μg/ml 4 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
30μg/ml 3 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
15μg/ml 2 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
7.5μg/ml 1 號標準品 150μl 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育3分鐘。
4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3
8. 洗滌:操作同5
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
 
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
 
存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:個月__



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