小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白（I-FABP）ELISA試劑盒技術(shù)參數(shù)

【資料簡(jiǎn)介】

小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)ELISA試劑盒原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 I-FABP 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 I-FABP與單抗結(jié)合，加入化的抗小鼠I-FABP，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，I-FABP濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中I-FABP濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標(biāo)板（Coated Wells）
96孔
酶標(biāo)抗體工作液（Enzyme Conjugate）
12ml
10×標(biāo)本稀釋液（Sample Buffer）
12ml
20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：10ng/瓶
2瓶
底物工作液（TMB Solution）
12ml
抗體工作液（Biotinylated Antibody）
12ml
終止液（Stop Solution）
12ml
小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)ELISA試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、尿液等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿作1：10稀釋（取20ul，加標(biāo)本稀釋液180ul,稀釋10倍）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成10ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)ELISA試劑盒檢測(cè)程序
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。