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人鉤端螺旋體IgMELISA試劑盒使用方法

2015年03月11日 08:38:56人氣:352來源:上海滬宇生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小47104
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關 鍵 詞ELISA試劑盒
【資料簡介】


本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱:

通用名:鉤端螺旋體IgM酶聯免疫分析試劑盒

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中鉤端螺旋體IgM含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人鉤端螺旋體IgM水平。用純化的人鉤端螺旋體IgM抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入鉤端螺旋體IgM,再與HRP標記的鉤端螺旋體IgM抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鉤端螺旋體IgM呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人鉤端螺旋體IgM濃度。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

3ml×1

8

標準品(36ng/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×4

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

3ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

3ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

3ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為24ng/L16ng/L 8ng/L4ng/L 2ng/L)。
  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  
  4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  7. 溫育:操作同3
  8. 洗滌:操作同5
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

上海滬宇生物科技有限公司作者

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