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人骨鈣素(BGP)elisa資料技術(shù)說(shuō)明

2014年12月19日 14:34:21人氣:223來(lái)源:上海elisa試劑盒公司|廣銳生物

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【資料簡(jiǎn)介】

人骨鈣素(BGP)elisa資料技術(shù)說(shuō)明 廣銳生物-國(guó)內(nèi)高、優(yōu)Elisa試劑盒供應(yīng)商

目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中骨鈣素(BGP)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人骨鈣素(BGP)水平。用純化的人骨鈣素(BGP)抗體
包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入骨鈣素(BGP),再與HRP 標(biāo)記的
骨鈣素(BGP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。
TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的骨鈣素(BGP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲
線(xiàn)計(jì)算樣品中人骨鈣素(BGP)濃度。

人骨鈣素(BGP)elisa資料技術(shù)說(shuō)明

操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為900ng/L,600ng/L ,300ng/L,150ng/L, 75ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30(48T 的20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T 的20 倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

人骨鈣素(BGP)elisa資料技術(shù)說(shuō)明

上海elisa試劑盒公司|廣銳生物作者

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