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9015-85-4,T4 DNA連接酶生產(chǎn)

2014年06月09日 11:38:35人氣:355來(lái)源:上海elisa試劑盒公司|廣銳生物

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【資料簡(jiǎn)介】

注意:聚乙二醇(PEG)可*地增加平末端DNA的連接效率,PEG4000在反應(yīng)體系中的*濃度為5%(w/v),T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存,轉(zhuǎn)化時(shí),連接產(chǎn)物的體積不得超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%,電轉(zhuǎn)化之前,先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質(zhì)量控制:測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測(cè):粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀:液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途:生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接,雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接,雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù),連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè),位點(diǎn)特異性突變,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性
保存: -20°C

9015-85-4,T4 DNA連接酶生產(chǎn)

級(jí)別:BR
分子量:55.3kDa,單體
來(lái)源:含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度:1u/ul(200CEU/ul)
活性定義:是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位:20ul反應(yīng)體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量) 
酶活性分析混合物:66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分:20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT,0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油
10×T4 DNA Ligase緩沖液(#B69):400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)
50% PEG溶液:50%(w/v)聚乙二醇4000
抑制劑:當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過(guò)200 mM時(shí),可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活:65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘

9015-85-4,T4 DNA連接酶生產(chǎn)
 

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