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技術(shù)中心

大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)定量檢測 ELISA kit

2013年10月15日 11:54:05人氣:454來源:上海裕平生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞美國進口,酶聯(lián)免疫試劑盒,ELISA試劑盒,48T/96T,進口分裝
【資料簡介】

            大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)定量檢測試劑盒(ELISA

                                         使用說明書

                                                                                                                          

【試劑盒名稱】

大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)定量檢測試劑盒(ELISA)

【試劑盒用途】

定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅱ型膠原(ColⅡ)的含量。

 上海裕平生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,品質(zhì),價格實惠,售后完善,并提供免費代檢測服務(wù)。 

【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠Ⅱ型膠原ColⅡ )單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)含量。

 

試劑盒組成

1

酶標(biāo)包被板

12孔×8條

7

顯色劑A液

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品

0.6mL

8

顯色劑B液

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

樣本稀釋液

6mL

10

說明書

1份

5

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

11

封板膜

2張

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1個

備注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:8、4、2、1、0.5、0.25 μg/L

 

需要而未提供的試劑和器材

1、37℃恒溫箱

  1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
  2. 精密移液器及一次性吸頭
  3. 蒸餾水
  4. 一次性試管
  5. 吸水紙

 

操作步驟

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對照孔不加。

7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

 

樣本要求

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

 

注意事項

1、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

5、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時間。

6、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

7、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。

8、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

 

【操作程序總結(jié)】

 

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內(nèi)讀OD值

 

計算

 

【檢測范圍】

0.25μg/L - 8μg/L

【規(guī)格】

96T/盒

【貯藏】

2-8℃,避光防潮保存。

【有效期】

6個月

   上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營各種品牌檔次的ELISA試劑盒,*,售后服務(wù)完善。并提供免費代檢測。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。技術(shù)人員更好的為您服務(wù)。
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上海裕平生物科技有限公司作者

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