人前列腺素E2酶聯(lián)免疫分析

【資料簡(jiǎn)介】

人前列腺素E2酶聯(lián)免疫分析

藥品名稱(chēng)：
通用名：人前列腺素E2（PGE2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
　本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、或其它組織液中前列腺素E2（PGE2）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人前列腺素E2（PGE2）水平。用純化的抗-PGE2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人前列腺素E2（PGE2），再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2（PGE2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人前列腺素E2（PGE2）濃度。

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。血清、血漿可以直接檢測(cè)
2．組織：按相關(guān)文獻(xiàn)提取后，取上清液待測(cè)
3．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
4．可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

人前列腺素E2酶聯(lián)免疫分析

操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為（480ng/L ，320ng/L，160ng/L，80ng/L， 40ng/L）。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

人前列腺素E2酶聯(lián)免疫分析

計(jì)算
　  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

 
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
檢測(cè)范圍：
　25ng/L– 500ng/L
規(guī)格：
　96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月

pre-X protein（CT）[Hepatitis B virus C-Terminus] 抗乙肝病毒pre-X蛋白抗體（C端） 0.2ml
Profilin 2 前纖維蛋白2抗體 0.2ml
Recomb Protein G 抗重組蛋白G抗體 0.2ml
Recomb Protein A 抗重組蛋白A抗體 0.2ml
RAM-11 RAM-11抗體 0.2ml
RAMP-1 受體活性修飾蛋白1抗體 0.2ml
PRMT1（protein arginine methyltransferase 1） 蛋白質(zhì)*甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
PRCP（prolylcarboxypeptidase） 脯氨酰羧肽酶抗體 0.2ml
pig IgG/FITC 熒光素標(biāo)記豬IgG 0.3ml
pig IgM/FITC 熒光素標(biāo)記豬IgM 0.3ml
Mink IgG/FITC 熒光素標(biāo)記水貂IgG 0.3ml
Rabbit IgG/FITC 熒光素FITC標(biāo)記兔IgG（細(xì)胞流式同型對(duì)照） 0.3ml
Rabbit IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔IgM 0.3ml
PRDX3（peroxiredoxin 3） 過(guò)氧化還原酶3抗體 0.2ml
RRM1（ribonucleotide reductase R1 mRNA） 抗核糖核苷酸還原酶1抗體 0.2ml
PRL （Prolactin） 鼠抗人泌乳素抗體 0.2ml
PRL-2（Protein tyrosine phosphatase type IV A protein 2） 肝再生磷酸酯酶2抗體 0.2ml
PH-4/P4H-TM（proline 4-hydroxylase） *水解酶4抗體 0.2ml
PHD3 （Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3;） *羥化酶抗體 0.2ml
Goat anti-chi IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗雞IgG 0.3ml
Goat anti-chi IgM/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗雞IgM 0.3ml
Rb FITC/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗FITC 0.3ml
PS-1 （Presenilin-1/S182）（NT） 早老素蛋白-1抗體 0.2ml
PS-1（Presenilin-1/S182）（CT） 早老素蛋白-1抗體 0.2ml
PSA （Prostate specific antigen） for conjugation and detection 鼠抗人前列腺特異性抗原抗體 0.2ml
PSAP/PAP（Prostate Specific Acidic Phosphatase） 前列腺酸性磷酸酶抗體 0.2ml
PSCA （Prostate Stem Cell gen） 抗前列腺干細(xì)胞抗原抗體 0.2ml
PSD-95 突觸后密度蛋白95抗體 0.1ml