通用型LAMP試劑盒使用說明書

【資料簡介】

 1.        在冰上溶解除酶外的各種組份，混勻，稍離心。在反應管中加入以下組份：

成份	樣品管	陰性對照
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
FIP引物終濃度	0.8 uM	0.8 uM
BIP引物終濃度	0.8 uM	0.8 uM
F3引物終濃度	0.2 uM	0.2 uM
B3引物終濃度	0.2 uM	0.2 uM
Loop F引物終濃度（可選項）	0.4 uM	0.4 uM
Loop B引物終濃度（可選項）	0.4 uM	0.4 uM
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
補水到	20 uL	20 uL

注：如在反應管中加入本公司PCR級綠如藍染料1uL（水則少加1 uL），則可直接在熒光定量PCR儀中進行熒光定量檢測。

2.       混勻，置于60-65℃保溫30-120分鐘。注意：如果不使用Loop引物，則保溫2小時；如果使用Loop引物，則保溫30分鐘。

3.       80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。

4.       產物置于-20℃備用或立即用于下游檢測。擴增產物可選下列方法之一檢測:

1）        瓊脂糖凝膠電泳。取擴增產物5 uL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP特征性電泳圖譜；

2）        向擴增產物中直接加入本公司PCR級綠如藍染料（另售）1 uL，混勻，稍離心。將反應管置于紫外透射儀或凝膠成像系統中，紫外燈下可見綠色熒光產生；

3）        熒光定量檢測。

5.       結果分析：

1）        如果沒有擴增，則需要用本試劑提供的陽性對照進行擴增。本試劑盒提供5次陽性對照，反應按下表設置：

成份	陰性對照管	陽性對照管
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
對照引物混合物	4.0 uL	4.0 uL
對照模板DNA	不加	1 uL
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
水	1.5 uL	0.5 uL

混勻后，置于60℃保溫120分鐘，其余操作同上。注意：本對照引物中沒有Loop引物，所以保溫2小時。

如果陽性對照能夠擴增出，則說明試劑盒沒有問題，可能是模板或引物的問題。如果陽性對照沒有擴增出條帶，則是試劑盒的問題，請跟廠家。