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植物脫落酸聯免疫分析(ELISA)

2012年04月27日 10:19:33人氣:617來源:上海研鑫生物科技有限公司

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關 鍵 詞植物脫落酸聯免疫分析(ELISA)
【資料簡介】

植物脫落酸(ABA)聯免疫分析(ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱:

通用名:植物脫落酸(ABA聯免疫分析試劑盒

使用目的:

本試劑盒用于測定植物相關樣本中脫落酸(ABA含量。

實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中植物脫落酸(ABA)水平。用純化的植物脫落酸(ABA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的植物脫落酸(ABA標準品和未知濃度的植物脫落酸(ABA待檢樣品,溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物脫落酸(ABA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物脫落酸(ABA)濃度。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1

 

 

9

標準品S160μg/L

0.5ml×1

2

鏈霉親和素-HRP

6ml×1

標準品S240μg/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×8

標準品S320μg/L

0.5ml×1

4

*標記的抗-IgG抗體

6ml×1

標準品S410μg/L

0.5ml×1

5

顯色劑A

6ml×1

標準品S5g/L

0.5ml×1 

6

顯色劑B

6ml×1/

10

密封袋

1

7

終止液

6ml×1

11

封板膜

3

8

樣品稀釋液

6ml×1

12

說明書

1

 

標本要求

1不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

操作步驟

1.       根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

2.       加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37溫育45分鐘。

3.       配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.       洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。

5.       加*標記的抗-IgG抗體:每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl37溫育30分鐘

6.       洗滌:操作同4

7.       加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37溫育30分鐘。

8.       洗滌:操作同4

9.       顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.   終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.   測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.  如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(×5×n)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

線形范圍:

g/L -70μg/L

規格:

96人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

 

 上海研鑫生物科技有限公司專業提供科研類進口原裝、進口分裝全系列品牌酶聯免疫ELISA試劑盒。產品種類齊全、現貨供應質量長期保障,是多家科研機構和高校ELISA試劑盒供應商,歡迎各位新老客戶惠顧!如需咨詢相關產品信息或產品詳細說明請致電:,或在線客服 更多相關產品請點擊公司:

 

上海研鑫生物科技有限公司作者

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