葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒

【資料簡介】

測定意義

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生H₂O₂，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。

測定原理

GOD催化產生H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化H₂O₂分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。

試驗中所需的儀器和設備

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體×1支，4℃保存；

樣品測定的準備

組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）：直接檢測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至500nm，蒸餾水調零。

2、GOD檢測工作液的配制：用時將試劑二和試劑三轉移至試劑一中，充分混勻，待用。

3、測定前將GOD檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

4、在EP管中加入10μL樣本和240μL工作液，立即混勻并計時，立即取200µL轉移至微量石英比色皿或96孔板中，記錄500nm下20s吸光值A1和1min20s后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。

GOD活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）GOD活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷V樣÷T=3333×ΔA

2、動物組織GOD活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣)÷T=3333×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/ g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（V樣÷V樣總×W）÷T=3333×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，2.5×10^-4 L；ε：氧化型鄰聯茴香胺摩爾消光系數，7.5×10³mol/L/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）GOD活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷V樣÷T=6666×ΔA

2、動物組織GOD活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣)÷T=6666×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/ g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（V樣÷V樣總×W）÷T=6666×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，2.5×10^-4 L；ε：氧化型鄰聯茴香胺摩爾消光系數，7.5×10³mol/L/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。