人乙肝（HBV）elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

【資料簡介】

                       人乙肝(HBV)elisa試劑盒樣品處理及操作步驟

樣品收集、處理及保存方法

1、 血  清-----操作過程中避免任何細胞刺激，使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細

胞迅速小心地分離。

2、 血  漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測，1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿--－將組織加入適量鹽水搗碎，1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保  存----如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-80 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血，如果

血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾，不要在37℃或更高的溫度加熱解凍，應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，每個標準品和空白孔建議做復孔，每個樣品根據自己的數量來定，能使

用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩

混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加

一次。

5． 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加

一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。