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*(glutamic acid,Glu)含量試劑盒

2017年09月18日 09:53:03人氣:350來(lái)源:齊一生物科技(上海)有限公司

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關(guān) 鍵 詞*(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
【資料簡(jiǎn)介】

*(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 測(cè)定意義:
Gu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一, 而且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外,Glu 還是 味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
*(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定原理:
利用提取液提取,然后用顯色劑進(jìn)行顯色,顯色后在 570nm 下進(jìn)行測(cè)定。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分混勻溶解,用不完的試劑 仍 4℃保存。
*提?。?br />1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞 數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1000  萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 2mL 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重 復(fù) 30 次);8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.2g 組 織,加入 2mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 3、血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積(mL):試劑一體積 (mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.2mL 血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一),進(jìn) 行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋 EP 管中加入下列試劑:
試劑名稱(μL)    測(cè)定管    對(duì)照管
樣本    1000    
試劑一        1000
試劑二    200    200
混勻,90℃水浴 20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,于 570nm 波長(zhǎng)處比色,△A=A
測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。 
*(glutamic acid,Glu)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)注意事項(xiàng):
為提高檢測(cè)靈敏度,測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于 1,若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適 當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。


*含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423; x 為*含量(µg/mL),y 為吸光值。
2、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
*含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2)=304.9×(△A+2.423)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
*含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
*含量(µg/g 鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
*含量(μg/104 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;V3:加入血清(漿) 或細(xì)胞培養(yǎng)液體積,0.2 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;1000: 細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),1000 萬(wàn)。 注意:該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中*含量測(cè)定,檢測(cè)下限為 70µg/mL。

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