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*(glutamic acid,Glu)含量試劑盒

2017年09月18日 09:53:03人氣:349來源:齊一生物科技(上海)有限公司

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關 鍵 詞*(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書
【資料簡介】

*(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定 測定意義:
Gu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,不僅是組成蛋白質的 20 種氨基酸之一, 而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內主要氨基來源之一。此外,Glu 還是 味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產。
*(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書測定原理:
利用提取液提取,然后用顯色劑進行顯色,顯色后在 570nm 下進行測定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分混勻溶解,用不完的試劑 仍 4℃保存。
*提取:
1、細菌或培養細胞樣品:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞 數量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1000  萬細菌或細胞加入 2mL 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重 復 30 次);8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。 2、組織樣品:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.2g 組 織,加入 2mL 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。 3、血清(漿)或細胞培養液樣品:按照血清(漿)或細胞培養液體積(mL):試劑一體積 (mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.2mL 血清(漿)或者細胞培養液加入 2mL 試劑一),進 行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟
1、 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 570nm,蒸餾水調零。
2、 在有蓋 EP 管中加入下列試劑:
試劑名稱(μL)    測定管    對照管
樣本    1000    
試劑一        1000
試劑二    200    200
混勻,90℃水浴 20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,于 570nm 波長處比色,△A=A
測定管-A 對照管。對照管只要做一管。 
*(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書注意事項:
為提高檢測靈敏度,測定管的吸光值應小于 1,若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適 當倍數后測定,計算公式中乘以相應稀釋倍數。


*含量計算:
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423; x 為*含量(µg/mL),y 為吸光值。
2、按照血清(漿)或者細胞培養液體積計算
*含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2)=304.9×(△A+2.423)
3、按照蛋白濃度計算
*含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照樣本質量計算
*含量(µg/g 鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
*含量(μg/104 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)
V1:加入反應體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;V3:加入血清(漿) 或細胞培養液體積,0.2 mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1000: 細菌或細胞總數,1000 萬。 注意:該試劑盒僅適用于發酵液或組織中*含量測定,檢測下限為 70µg/mL。

齊一生物科技(上海)有限公司作者

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