大鼠二胺氧化酶elisa試劑盒使用說明書

【資料簡介】

大鼠二胺氧化酶elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用純化的大鼠二胺氧化酶(DAO)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠二胺氧化酶(DAO)，再與HRP標記的二胺氧化酶(DAO)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠二胺氧化酶(DAO)濃度。 
標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠二胺氧化酶elisa試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800 IU/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400 IU/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200 IU/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100 IU/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50 IU/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為大鼠二胺氧化酶elisa試劑盒樣品的實際濃度。