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DNA顯示和細胞有絲分裂相的觀察實驗

時間:2016-11-21閱讀:614
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核酸是生物zui重要的組成成分,核酸分為兩大類,即脫氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它們在細胞內的分布及化學性質均有所不同。DNA主要分布在核的染色質或有絲分裂過程中出現的染色體內。RNA分布在細胞質和核仁內。但在染色質及染色體中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA。在線粒體,葉綠體等細胞器內除含有RNA外,也含有少量的DNA。 

一、目的與要求 
了解Feulgen反應的基本原理,學習其操作方法和壓片法,初步掌握細胞分裂各期的主要特點。 

二、原理 
Feulgen反應的原理是根據DNA經弱酸(1mol/L)水解后,打開料嘌呤和脫氧核糖連接的鍵,在脫氧核糖的一端形成有離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結合,形成含醌基( )的化合物,醛基是一個發色團所以具有顏色,因此凡有DNA的部位,就呈現紫紅色。 

三、實驗內容 
1. DNA的顯示法-Feulgen反應 
2. 壓片法 
3. 細胞有絲分裂相的觀察 

四、 實驗步驟 
(一) DNA的顯示法-Feulgen反應 
以蠶豆根尖或洋蔥根尖為材料,進行Feulgen反應的具體操作程序如下: 

切取根尖 
↓ 長度0.3-0.5cm 

Camoy固定劑 
↓ 固定10-30分鐘 

95%酒精 
↓ 10分鐘 

70%酒精 
↓ 10分鐘 

蒸餾水 →(對照) 5%三氯醋酸 
↓ ↓90oC 15分鐘 
1mol/L HCl ← 蒸餾水 
↓ 室溫 

1mol/L HCl 
↓ 60 oC 8分鐘 
Schiff試劑 
↓ 40 -60分鐘 

亞硫酸水(1,2,3) 
↓ 換3次,每次5分鐘 

自來水 
↓ 將染色后的根尖漂洗干凈,懸著染色效果好的材料 

蒸餾水 
↓ 

壓片 
↓ 

鏡檢

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