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urkat細胞(人外周血白血病T細胞)的傳代

時間:2014-11-5閱讀:1311
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urkat細胞(人外周血白血病T細胞),是一種懸浮細胞。我的經驗如下:

1、培養液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,100IU/1ml,100IU/ml;

2、培養條件:5%CO2,37度,30%濕度;

3、細胞復蘇:要快速將凍存管放入37度水中,不斷輕輕搖晃,直到細胞*溶解,加入10ml左右的培養液,800~1000rpm,10分鐘離心,之后倒掉液體,加入新的培養基就可以進行培養了;

4、細胞培養:起初進行傳代時由于細胞剛剛復蘇,長得比較慢,所以可以3~4天傳一代,傳過兩代后,一般2~3天傳一代,每次傳代后在倒置顯微鏡下觀察細胞形態,在傳過幾代合適的時候可以進行實驗。

5、細胞凍存:1000rpm離心后,棄去液體,加入含有15%DMSO的凍存液,按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-80℃ 1小時)→液氮。

6、我在做細胞培養時的一些小經驗:

(1)細胞培養箱在每使用1個月用酒精擦洗一次,這樣可以減少污染;

(2)雖然說加樣器放在紫外下照射會不準,但我們還是丟了一把1ml的加樣器在超凈臺,沒有拿出來過,我想這樣也許會減少污染;

(3)小牛血清我們用的是國產的,所以在一開始的時候加了15%的小牛血清,但細胞總是長不好,后來摸索條件,把小牛血清的量調到了20%,細胞生長旺盛;

(4)HEPES雖然貴點,但加上去后細胞會長的不錯;

(5)在超凈臺操作前要用0.1%的新潔爾滅或75%酒精擦手。

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