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士鋒生物氨基轉移反應的定性鑒定

時間:2014-5-20閱讀:886
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氨基移換酶也稱轉氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基互換,這種作用稱為氨基移換作用。它在生物體內蛋白質的合成與分解等中間代謝中,在糖、脂肪、蛋白質三類物質代謝的相互、相互轉化上都起著很重要的作用。任何一種氨基酸進行轉氨作用時,都由其專一的轉氨酶催化。它們的zui適pH 接近7.4。在各種轉氨酶中,以草酰乙酸轉氨酶(簡稱谷草轉氨酶、GOT)及丙酮酸轉氨酶(簡稱谷丙轉氨酶、GPT)活力zui強。它們催化的反應如下:


上述兩種酶均廣泛存在于生物機體中,在正常人血清中也有少量存在。機體發生肝炎、心肌梗塞病變時,血清中轉氮酶活力顯著增加,在臨床上轉氨酶活性的測定有重要意義。
測定轉氨酶活性的方法很多,如分光光度法,紙上層析法及光電比色法等。本實驗利用紙層析法,檢查由和丙酮酸在谷丙轉氨酶的作用下所生成的,證明組織內氨基移換作用。為了防止丙酮酸被組織中其它酶所氧化或還原,可加碘乙酸或溴乙酸抑制酵解作用或氧化作用。
三、儀器、原料和試劑
儀器
解剖刀、剪及鑷子、 解剖盤表面皿、勻漿器、臺秤、離心管和離心機(臺式)、試管及試管架、恒溫水浴、毛細玻璃管、直尺、2H 鉛筆、層析濾紙(國產新華1號濾紙)、電熱鼓風干燥箱、層析用具:玻璃鐘罩、層析缸和小燒杯。針、線、噴霧器。
原料
實驗動物家兔
試劑
1. 1/15mol/L 磷酸緩沖液(pH=7.4)
2. 1%溶液(用KOH 中和至中性)
3. 1%丙酮酸溶液(用KOH 中和至中性)
4. 0.1%碳酸氫鉀溶液

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