腫瘤抑制基因抗體說明書，Anti-P53價格

細胞表面染色

1）   溶解血紅細胞。（注意：準備足夠的細胞用于10份樣品100μl/份檢測）。

1ml全血加入14ml恢復至室溫的1×FCM溶解液（sc-3621）中。

輕輕混勻，室溫孵育3-5min。不要超過5min。

離心5min，棄上清，預冷的5ml 1×PBS輕輕重懸沉淀。

離心5min，棄上清，預冷的1ml 1×PBS輕輕重懸沉淀。

2）準備培養細胞。（注意：本protocol通常處理50ml培養細胞。單層細胞，切勿*消化！用0.2%EDTA/PBS溶液代替。1×PBS洗細胞1次。）

*計數細胞。

1000rpm離心5min，棄上清，用足夠的1×PBS輕輕重懸沉淀至終濃度為1×10⁷細胞/ml。

每管加入100μl RBC溶解的全血或單細胞懸液。混勻，放在有蓋的冰盒內孵育15-30min。

每管加入1.5ml FCM沖洗緩沖液（sc-3624），顛倒混勻。1000rpm離心5min，棄上清，500μl 1%多聚甲醛重懸沉淀。

測讀分析數據。

50ml離心管收集細胞。2000rpm離心5min，棄上清。

室溫1×PBS 20ml重懸細胞。

細胞計數。

2000rpm離心5min除去PBS。4℃1×PBS洗1次。2000rpm離心5min除去PBS。

每10⁶個細胞加入1ml 4℃ FCM固定緩沖液（sc-3622），冰育15-30min。

4℃1×PBS洗細胞2次，離心，棄上清。

每10⁶個細胞加入1ml -20℃ FCM滲透緩沖液（sc-3623），逐滴加入混懸。冰育15min。

離心；4℃ FCM沖洗緩沖液（sc-3624）。

2000rpm離心5min，棄上清。每10⁷個細胞加入1ml FCM沖洗緩沖液，然后等分細胞（10⁶）至各待測管中。

細胞內著染：各管加入熒光染料標記的*抗體或isotype control。室溫避光孵育1hr。

24hrs內檢測分析。