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促代謝型*受體5抗體,Anti-GRM5/mGluR5

時間:2012-12-22閱讀:456
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本公司長期供應(yīng)免疫組化抗體、WB抗體、免疫組化試劑盒和抗體試驗所需全部相關(guān)試劑、熒光標記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體。

 促代謝型*受體5抗體,Anti-GRM5/mGluR5抗血清的采集與保存

  家兔是zui常用以產(chǎn)生抗體的動物,因此這里主要討論兔血的收集。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,鼠等小動物取血可參閱有關(guān)資料。取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動脈放血,一是頸動脈入血,也可心臟采血。取動脈或靜脈放血時,將兔放入一個特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。剪去耳緣的毛,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的*片,快速切開動脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30~40ml 。然后用棉球壓迫止血,凝血后洗去二甲苯。二星期后,可在另一耳放血。此法可反復(fù)多次放血。頸動脈放血時,將兔仰臥,固定于兔臺,剪去頸部的毛,切開皮膚,暴露頸動脈,插管,放血。放血過程中要嚴格按無菌要求進行。

  收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,置4℃下,過夜(切勿冰凍)析出血清,離心,4000rpm,10min。在無菌條件,吸出血清,分裝(0.05~0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后貯存于4。C冰箱保存。

抗血清質(zhì)量的評價

  在免疫期間,不僅各個不同的動物,而且同一動物在不同的時間內(nèi)抗血清效價、特異性、親合力等都可能發(fā)生變化,因而必須經(jīng)常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親合力等方面作*的評價后,才可使用所取得的抗血清。

效價  抗血清的效價,就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價測定的方法常用的是放射免疫法,此法對所有的抗體均適用。某些由大分子(如蛋白類)抗原所產(chǎn)生的抗體,可用雙擴散等方法測定。前者測定的效價極為。而后者則粗糙得多。

  (1)放射免疫法: 以不同稀釋度的抗血清與標記抗原混合,孵育24h后,測定其結(jié)合率。通常以結(jié)合率為50%的血清稀度和為效價。如某抗血清的結(jié)合率為50%時的稀釋度為1:15000,則該血清的效價就是1:15000。抗血清的效價,除由抗血清本身的性質(zhì)決定外,還受標記抗原的質(zhì)量、孵育時間,所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響,在工作中必須引起注意。(測定方法見第8章 )

  (2)雙向擴散法:利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴散,兩者在相交處產(chǎn)生沉淀線,以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。

  球脂板的制備:100ml pH7.1 的磷酸鹽緩沖液加到15g的瓊脂內(nèi),于水浴中加溫,攪拌,使瓊脂*溶解,趁熱用紗布過濾,待溶液冷卻到65℃左右時,加入疊氮鈉(NaN3),使其在溶液中的濃度為0.1%。用移液管把瓊脂放在干凈平皿或玻片上,約3mm厚,待其冷卻,*凝固后,用打孔器打孔(圖2-4)。*孔內(nèi)加適量抗原(容量為50μl),周圍各孔內(nèi)分別加入50μl 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀釋的抗血清,37℃下孵育24h,觀察有無沉淀線產(chǎn)生,以判斷血清的稀釋度

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