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伴肌動蛋白抗體,Anti-Nebulin

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伴肌動蛋白抗體,Anti-Nebulin抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗9ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。

 

  抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在 IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示 這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為 0,即該血清的特異性較好。

 

  抗體的親和力 是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在 108 ~1010 /mol,也有多達 1014 /mol。抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。

免疫用的動物選擇適齡的健康雄性動物,雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時甚至不產生抗體。由于對免疫應答的個別差異,免疫時應同時選用數只動物進行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別。就其化學成分而言,有蛋白質抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清,是選用蛋白質抗原,如要制備用于篩選細菌表達的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,選用可降解的蛋白質抗原。不同的抗原,其免疫原性的強弱均不相同,這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學活性基團、立體結構、物理形狀和彌散速度等。

 
  抗原的免疫劑量是依照給予動物的種類、免疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過低,不能引起足夠強的免疫刺激,免疫劑量過多,有可能引起免疫耐受。在一定的范圍內,抗體的效價是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質抗原的免疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言,小鼠的免疫劑量為 50μg~400μg/次, 大鼠為100μg~1 000μg/次, 兔為 200μg~1 000μg/2次。加強劑量為劑量的 1/5~2/5。
 
  免疫劑量與注射途徑有關,一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內和跖內皮下注射劑量大,也可采用淋巴結內注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,采用弗氏*佐劑,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不*佐劑則注射劑量應大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得價的抗血清,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,可少量多次。免疫周期短者,應大量少次。 兩次注射的間隔時間應長短適宜,太短起不到再次反應的效果太長則失去了前一次激發的敏感作用。一般間隔時間應為 5~7 天,加佐劑者應為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應,如注射血清,即使是少量,在再次免疫時,極易引起過敏反應,所以一定要采取措施。

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