人T細(xì)胞白血病細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：在超凈臺內(nèi)，安裝好濾器。

用去離子水溶解1640培養(yǎng)基，并用磁力攪拌器攪拌2 h，使之充分溶解。

在超凈臺內(nèi)過濾。

分裝到250 mL的玻璃瓶內(nèi)。

用封口膜封好，-20℃保存，過濾結(jié)束時(shí)，還要取少許培養(yǎng)基進(jìn)行菌培，驗(yàn)證培養(yǎng)基是否是無菌。

胎牛血清的處理：

沒有滅活的血清中含有補(bǔ)體成分，需要將血清在56℃條件下滅活30 min。在水浴鍋內(nèi)進(jìn)行，滅活的過程中，要不停地?fù)u晃，使受熱均勻，防止沉淀析出來。

注意：

剛?cè)〕龅膬龃嫜宀灰⒓捶湃?6℃中，因?yàn)橥蝗坏臏囟壬邥寡b血清的玻璃瓶破裂，應(yīng)該放在室溫逐漸溶解，然后，再進(jìn)行滅活處理。

 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞生長培養(yǎng)基的配制：

90 mL IMDM中加入大約10 mL的胎牛血清（10% 左右），雙抗可以不加。

（有資料表明雙抗對細(xì)胞有一定的毒副作用）Hanks 和D-Hanks液，以及*的配制Hanks液是一種常用的*，D-hanks液是不含鈣鎂的Hanks液。它們與細(xì)胞的生長狀況下的pH值和滲透壓一致，細(xì)胞在Hanks液中可生存幾個(gè)小時(shí)，Hanks液主要用于清洗細(xì)胞。

D-Hanks液主要用于配制*。配制Hanks液需將CaCl2溶于蒸餾水，再將其它試劑配制成溶液，將兩次配制的溶液混合，定容。*是一種常用的細(xì)胞消化液，在原代培養(yǎng)時(shí)，用*消化，使細(xì)胞從組織塊中游離出來。

傳代培養(yǎng)時(shí)，用*消化貼壁的細(xì)胞，并分散成單個(gè)細(xì)胞。

*分離細(xì)胞的能力與不僅與*作用的溫度、時(shí)間、濃度和pH有關(guān)，還與細(xì)胞的類型和特性有關(guān)。

用于原代培養(yǎng)消化組織塊采用的濃度為：0.1% 或 0.125%；

用于傳代培養(yǎng)采用的*濃度為：0.25%或者0.2%。

*的配制：

1）由于*的作用主要機(jī)制是通過螯合鈣鎂離子，而鈣鎂離子是保持細(xì)胞和細(xì)胞之間相互連接所必需的，所以，*的配制用無鈣鎂的D-Hank液，避免鈣鎂離子干擾*的活性。

2）*在pH8.0時(shí)活性zui強(qiáng)，在過濾除菌前，須用NaHCO3干粉調(diào)溶液的pH值。

3）*受熱容易分解，所以避免盛夏配制，在配制過程中，溫度保持在4℃，zui后-20℃凍存。反復(fù)凍溶會影響*的活性，要分裝凍存。

4）血清能降低*的活性，所以，在終止*的消化反應(yīng)時(shí)，可加入含有血清的培養(yǎng)基。