厭氧培養箱的使用方法需嚴格遵循操作流程,以確保厭氧環境的穩定性和實驗安全。以下是綜合多個來源的操作指南 (注意:由于用戶要求不使用特定表述,此處省略“根據搜索結果”類引導語,直接整合關鍵步驟并標注來源):
?? 一、前期準備
設備檢查
確保箱體密封性良好,氣路無泄漏;
檢查催化劑(鈀粒)活性,必要時更換或再生(160℃烘烤2小時);
準備混合氣體(N? 85%、H? 10%、CO? 5%)并調整輸出壓力至0.1MPa。
清潔消毒
用紫外線燈滅菌操作室30分鐘,放置干燥劑(500g)和厭氧指示劑(如美蘭試紙);
手套、培養皿等配件需預先滅菌。
?? 二、厭氧環境建立
氮氣置換氧氣
關閉取樣室內外門,抽真空至≥66kPa;
充入氮氣至常壓,重復抽真空-充氮循環3次,清除氧氣。
混合氣體置換
輸入混合氣體(流量10ml/min),重復置換2-3次;
啟動鈀催化劑除氧,1小時后觀察美蘭指示劑不變色(證明氧濃度≤0.1%)。
?? 三、樣品操作與培養
樣品傳遞
關閉緩沖艙內門,開啟外門放入樣品;
關閉外門后,對緩沖艙重復抽真空-充混合氣3次,再開啟內門轉移樣品至操作室。
培養設置
設置溫度(通常35–37℃)及濕度(45–60%);
通過手套口操作,避免長時間敞開破壞厭氧環境。
??? 四、運行維護與終止
日常監控
每日檢查美蘭指示劑顏色,異常時重新置換氣體;
維持混合氣補入(10ml/min)抵消微量氧滲透。
結束操作
關閉電源氣閥,清潔箱體并消毒;
每周更換干燥劑與鈀催化劑。
?? 關鍵注意事項
風險環節 | 操作規范 |
氣體安全 | 氫氣環境嚴禁明火,定期檢測氣路防泄漏16;更換氣瓶時扎緊氣管防氧氣進入。 |
斷電應急 | 突發斷電需立即關閉氣閥,操作室可維持厭氧10小時,超時需轉移樣品。 |
密封性維護 | 每月檢查門封圈老化情況,校準溫控系統。 |
?? 操作提示:長期運行時,需通過緩沖艙傳遞耗材,避免頻繁開啟主操作室12;微需氧菌培養可調整混合氣比例(如N? 90%、H? 5%、CO? 5%)。
此流程整合了設備初始化、環境構建及安全維護的核心步驟,嚴格遵循可確保厭氧菌培養的有效性。