懸浮細胞轉染試劑-QuickShuttle-Superfast 快速轉染試劑

QuickShuttle-Superfast 快速轉染試劑

貨號：KX0110043 

含量：0.8 ml 

用途：（1）用于大多數哺乳動物貼壁細胞系的瞬時轉染和穩定細胞系構建（立傳立轉）； 

           （2）用于大多數哺乳動物懸浮細胞系的穩定細胞系構建。 

注意事項： 

1. 質粒 DNA：請用能夠去除內毒素的方法制備高質量的質粒 DNA。

 2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

 3. 培養基：經過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規培養基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉染效果不理想可嘗試其它培養基。 

4. 以 24 孔細胞板轉染實驗為例，推薦每孔低內毒素質粒 DNA 用量為 1~2µg、轉染試劑用量為 3~5µl， 請在正式實驗前根據不同細胞和不同培養基用報告基因進行優化。 

5. 對于大多數哺乳動物貼壁細胞系，立傳立轉要求使用生長旺盛的細胞，即細胞生長至 80-90%成片或 剛長滿。若使用生長過老的細胞，將明顯影響立傳立轉的效率。 

6. 本品不推薦用于貼壁性較差的貼壁細胞系，如各種 293 細胞等。 

7. 本品對大多數哺乳動物懸浮細胞系有一定轉染效率，可用于穩定細胞系構建。 

使用方法 ：

1. 將懸浮細胞或新鮮消化的貼壁細胞接種到 24 孔細胞板中，每孔 1~2×105細胞，1ml 培養基。

備 注：可在生長旺盛的貼壁細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉染，無需 18~24 小時的等候時間。

 2. 將 1~2μg 質粒 DNA 和 3~5μl 轉染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。備注：質粒 DNA 和轉染試劑的 量需要根據不同細胞和不同培養基來優化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。

4. 將上述復合物直接加入到細胞培養基中，用加樣器吸打混勻。

備注：轉染復合物可直接加入含血清的 細胞培養基中進行轉染。 

5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養。

備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血清或更換培養 基。

 6. 24~72 小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩定細胞系加壓篩選。

備注：對于一些轉染效率高的 細胞系如 BHK-21 等，可在轉染后 24 小時進行后續實驗。