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豬Apelin(APLN)ELISA試劑盒實驗?操作步驟

閱讀:703      發(fā)布時間:2021-9-15
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豬Apelin(APLN)ELISA試劑盒操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

軟骨外胚層發(fā)育不良相關(guān)蛋白抗體

髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體

雌激素受體α抗體

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體

鋅指蛋白521抗體

大腸桿菌埃希桿菌O6抗體

植物延展素-β

內(nèi)皮素-1抗體

絲裂原活化蛋白激酶4抗體

埃茲蛋白抗體

細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體

內(nèi)皮素-1單克隆抗體

腸道病毒71型抗體

抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體

表皮生長因子抗體

表皮生長因子抗體

磷酸化真核翻譯延長因子2抗體

真核延伸因子激酶2抗體

磷酸化真核延伸因子激酶2抗體

真核啟動因子2α抗體

磷酸化一氧化氮合成酶3抗體

真核翻譯延長因子2抗體

癌基因ERG3抗體

豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體

FAS凋亡抑制分子3抗體

纖維束1抗體

叉頭蛋白P3抗體


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