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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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細(xì)胞分裝與凍存
2025-6-16 閱讀(1)
細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無限的。
細(xì)胞分裝與凍存：
1.將重懸后的細(xì)胞懸液分裝至標(biāo)記好的凍存管中，每管分裝的細(xì)胞懸液體積一般為 1 - 1.5 ml。在分裝過程中，要注意避免產(chǎn)生氣泡，同時(shí)確保凍存管密封良好。
2.由于使用的凍存方式不同會(huì)有不同的凍存方法，請(qǐng)選擇合適的凍存步驟。
a. 使用傳統(tǒng)方法：將凍存管先放入 4℃冰箱中靜置60 分鐘，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)低溫環(huán)境。然后將凍存管轉(zhuǎn)移至 -20℃冰箱中放置2小時(shí)，接著再放入-80℃冰箱過夜。最后，將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進(jìn)行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時(shí)間，防止細(xì)胞受損。
b. 使用凍存盒：將凍存管放入4℃預(yù)冷的凍存盒（確保凍存盒已加滿或更新異丙醇）中，然后快速將凍存管轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。最后，將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進(jìn)行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時(shí)間，防止細(xì)胞受損。
c. 使用細(xì)胞凍存液：將凍存管轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，然后將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐中進(jìn)行長期保存。在轉(zhuǎn)移過程中，要盡量縮短凍存管在室溫及 -20℃以上環(huán)境中的停留時(shí)間，防止細(xì)胞受損。
