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上海仁捷生物科技有限公司

上海仁捷生物-植物(AOS)ELISA試劑盒活性檢測操作原理

時間:2017-7-10閱讀:478
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植物丙二烯氧化物合酶AOS試劑盒(ELISA)

本試劑盒用于體外定量檢測組織、細胞及相關液體樣本植物丙二烯氧化物合酶AOS)的活性。

 

實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物丙二烯氧化物合酶(AOS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物丙二烯氧化物合酶(AOS)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

8孔×12

8孔×6

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

*

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

1.  標準品濃度依次為:80、40、20、10、5、2.5 U/L

2.  經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用*將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

試劑盒性能

  •  檢測范圍2.5 U/L  80 U/L
  •  靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 U/L
  •  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
  •  重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

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