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閱讀：436發(fā)布時間：2017-5-3
酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）實驗
實驗目的
酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA）是在免疫酶技術（immunoenzymatic techniques）的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術，ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗體（抗原），再加相應酶標記抗體（抗原），生成抗原（抗體）——待測抗體（抗原）——酶標記抗體的復合物，再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量，待測抗體（抗原）的定量與有色產(chǎn)生成正比。
實驗原理
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫徐活性；
（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
（3）酶結(jié)合物與相應抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺與標本中相應抗原或抗體的量成正比。因此，可以按底物顯色的程度顯示實驗結(jié)果。
應用：
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本。因此，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來檢測抗體，而且可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大，可概括為四個方面：1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成分的定位。2、研究酶抗體的合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。4、定量檢測體液中抗原或抗體成分。
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