PK-15細胞低血清培養：

一、PK-15細胞低血清培養：

1、細胞形態

    在方瓶中使用低血清培養基（MD611）逐代降低血清使用量，進行細胞的低血清馴化適應，在低血清培養狀態下，細胞具有清晰的輪廓、立體感較強，細胞更致密，與原培養液的細胞形態無差異。

2、細胞增殖情況

    PK-15細胞以一定接種密度（3-4×104個/cm2）接種方瓶進行連續傳代，3d左右細胞可形成單層或致密單層，需及時傳代。如下圖所示，使用低血清培養基+5%NBS培養的細胞與DMEM+10%NBS培養的增殖速率基本無差別，細胞3d可增殖6-7倍，細胞數可達2×107個/T75。

二、MD611低血清培養基的配制方法：

    MD611培養基不同于傳統的培養基，培養基的正確配制和使用方法影響細胞的培養效果，應嚴格按使用說明書配制使用。以50L/包規格低血清培養基為例，應按以下程序配制培養基。

1.打開培養基包裝，將培養基全部倒入一容器中。

2.用少量冷卻注射用水（20℃～30℃）涮洗袋內殘留培養基，倒入容器內。

3.向容器中加入約40L冷卻注射用水（20℃～30℃），攪拌至培養基*溶解。

4.按使用說明書標示量加入114.5克*，攪拌至*溶解，補加冷卻注射用水（20℃～30℃）至50L，充分混合，用pH計檢測，溶液pH應為7.2～7.4。

5.按使用量加入血清和抗生素，混合均勻，用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。

6.除菌后培養基，置2℃～8℃避光保存。

三、MD611低血清培養基一些注意事項：

1.不可配制成濃縮液儲存使用。

2.不可用高壓濕熱法進行滅菌。

3.不可冷凍儲存，再溶解使用。

4.不可常溫儲存，2～8℃儲存。

5.該培養基中已含*，由于*不穩定，易分解，產生對細胞敏感的毒性物質，故加入血清的*培養液應盡快使用完畢。

6.該培養基中所含指示劑酚紅的量是常規量的一半，故從外觀上看所配溶液顏色較淺，判定pH時，建議用pH計測定pH。

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