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貨號	CS-X3321	規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶
生長特性	貼壁	組織來源	海綿體組織

產(chǎn)品信息：

貨號	CS-X3321	組織來源	海綿體組織
傳代特性	可傳1-3代左右	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細胞形態(tài)	成纖維細胞樣	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%	換液頻率	每2-3天換液一次

小鼠海綿體平滑肌細胞

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：小鼠海綿體平滑肌細胞
2.組織來源：海綿體組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠海綿體平滑肌細胞分離自海綿體組織；海綿體，又稱海綿體肌，是硬的平滑肌和結(jié)締組織。海綿體是一種勃起組織，外面包有堅厚的白膜，內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通。它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質(zhì)的膠原中，在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細胞。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠海綿體平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性可傳1-3代左右

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞保存方法：

（一）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

小鼠海綿體平滑肌細胞

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠下丘腦神經(jīng)元細胞	人蛋白水解誘導因子/皮離蛋白(PIF/DCD)檢測試劑盒
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小鼠表皮角化上皮細胞	肉毒桿菌E型（CB-E）核suan檢測試劑盒

操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。