注意事項：

1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。盡管經測試本試劑反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，為取得良好的使用效果，*次解凍后可適當分裝保存。反復凍融過程中，可能會導致檢測試劑中出現少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經測試不會影響后續的檢測效果。

2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產生相互干擾。

3. ECM Kit(大鼠IgG)免疫檢測使用說明中提供了檢測ATP標準品的方法，實際檢測細胞活力時通常并不需要檢測ATP標準品。

保存條件：4℃可保存一年 。

Western Blotting 檢測試劑盒內容：

1.封閉試劑：10g 蛋白質干粉(脫脂奶粉)。

2.HRP 標記兔抗大鼠IgG：0.1ml 親和純化抗體，經過人血清吸附以去除交叉抗體。效價 1：2000-10000。

3.ECM 顯色劑：總量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每個試劑盒足夠 10 張小膜或800 c㎡面積的膜顯色

工作原理：

蛋白質的電泳分離是重要的生物化學分離純化技術之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下 ,向著與其電荷相反的電極移動的現象。根據所采用的支持物不同,可分為：瓊脂糖凝膠電泳、淀粉凝膠電泳、聚丙烯凝膠電泳等。其中以聚丙烯凝膠電泳(PAGE)廣泛。它的優點為：無電滲作用,樣品用量少(1-100μg),分辨率高,可檢出 10-9-10-12mol的樣品,凝膠機械強度大,重復性好以及可以通過調節單體濃度或單體與交聯劑的比例而得到孔徑不同的凝膠。SDS-PAGE 是的定性分析蛋白質的電泳方式,它根據蛋白分子大小不同，遷移速率的不同而達到分離目的，特別是用于蛋白質純度檢測和測定蛋白質分子量。

免疫印跡是將凝膠電泳的高分辨力和免疫化學檢測的特異性融為一體。免疫印跡技術首先借助凝膠電泳將蛋白質抗原分離，然后將凝膠中的蛋白質轉印到膜上使之成為被分離的一個拷貝。免疫印跡為檢測樣品中是否存在目的蛋白提供一種可靠的方法，該法鑒定蛋白質的原理是根據被測蛋白能與特異性抗體結合的特性并通過相對遷移率來體現該蛋白的分子量。如果想要了解樣品中是否存在某一抗原，以及該抗原的含量或該抗原多肽鏈的相對分子質量以及亞型，是否與其他蛋白結合，蛋白質的酪殘基是否發生磷酸化等有關問題均可采用免疫印跡。

免疫印跡包括多個簡單步驟，可在一到兩天完成，該方法具有高效，簡便，靈敏等特點。

實驗操作步驟：

1．蛋白質的樣品制備：

1)細胞培養蛋白質樣品的制備：

1：消化后裂解：細胞培養至 80%左右密度時，以含 0.25%yi蛋白酶消化,室溫，低速離心，棄上清。細胞經預冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根據細胞數量定)反復吹打。

用途：適于一抗為大鼠IgG的Western Blotting 檢測。

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細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調控；

⑤細胞分化及其調控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

細胞生物學研究的常用技術有哪些：

1.顯微技術：包括顯微觀察,顯微操作.

2細胞組分分析技術：離心分離技術,生物大分子定位技術,定量細胞化學分析技術.
3.細胞工程：細胞培養。