抗酒石酸酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒

商品介紹：

檢測(cè)緩沖液———————————15ml

顯色底物————————————2管

酒石酸溶液———————————1ml

p-nitrophenol溶液(10mM)—————0.1ml

反應(yīng)終止液———————————20ml

酸性磷酸酶也稱酸性磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個(gè)蛋白家族，哺乳動(dòng)物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分為兩類，一類為抗酒石酸酸性磷酸酶，一類為抗氟離子酸性磷酸酶。

抗酒石酸酸性磷酸酶是一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細(xì)胞和破軟骨細(xì)胞中高表達(dá)。在活化的巨噬細(xì)胞和神經(jīng)元中也有表達(dá)。抗酒石酸酸性磷酸酶在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧產(chǎn)生和鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)等有關(guān)。抗酒石酸酸性磷酸酶可以被破骨細(xì)胞釋放到血液中，幾乎被認(rèn)為是是機(jī)體破骨活性的血液指標(biāo)。

在一些疾病狀態(tài)下，如白血病性網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥、戈謝病、艾滋病導(dǎo)致的腦病、破骨細(xì)胞瘤、骨質(zhì)疏松和代謝性骨疾病有關(guān)。TRAP敲除小鼠有輕微的骨骼石化癥，TRAP轉(zhuǎn)基因小鼠有輕微的骨質(zhì)疏松。

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在堿性條件下，呈黃色產(chǎn)物，可以在400-415nm檢測(cè)吸光度。產(chǎn)物黃色越深， 說(shuō)明酸性磷酸酶檢活性越高，反之則酶活性越低。據(jù)此通過(guò)比色分析就可以計(jì)算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的酒石酸存在的情況下進(jìn)行酸性磷酸酶的活性檢測(cè)，檢測(cè)得到的酸性磷酸酶活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶活性。

注意事項(xiàng)：

1. 如果希望進(jìn)行酶活性的絕對(duì)定量，進(jìn)行酶反應(yīng)時(shí)必須注意精確計(jì)時(shí)。此時(shí)推薦采用孵育30分鐘等較長(zhǎng)的時(shí)間，以減小操作過(guò)程中的時(shí)間誤差。同時(shí)如果樣品中酶活性較高，則可以預(yù)先適當(dāng)稀釋樣品。

2. 樣品溶液中須避免出現(xiàn)各種酸性磷酸酶抑制劑。

商品屬性：

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長(zhǎng)較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過(guò)程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開(kāi)始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過(guò)電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過(guò)程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購(gòu)買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：