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醋酸纖維薄膜的加樣量和電量的選擇

時間:2015/6/29閱讀:336
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加樣量
加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關。作為一般原則,檢測方法越靈敏,加樣量則越少,對分離更有利。如加樣量過大,則電泳后區帶分離不清楚,甚至互相干擾,染色也較費時。如電泳后用洗脫法定量時,每厘米加樣線上需加樣品0.1 μl~0.5 μl約相當于5 μg~1000 μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時,每厘米加樣線加樣量不超過1 μl,相當于60μg~80μg的蛋白質。但糖蛋白和脂蛋白電泳時,加樣量則應多些。對每種樣品加樣量均應先作預實驗加以選擇。點樣好壞是獲得理想圖譜的重要環節之一,以印章法加樣時,動作應輕、穩,用力不能太重,以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。

電量的選擇
電泳過程應選擇合適的電流強度,一般電流強度為0.4 mA/cm~0.5 mA/cm寬膜為宜。電流強度高,尤其在溫度較高的環境中,可引起蛋白質變性或由于熱效應引起緩沖液中水分蒸發,使緩沖液濃度增加,造成膜片干涸。電流過低,則樣品泳動速度慢且易擴散。

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