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大鼠天*氨基轉移酶elisa試劑盒使用方法說明

時間:2014/10/27閱讀:356
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大鼠天*氨基轉移酶elisa試劑盒使用方法說明

操作步驟

1.標準品的稀釋:本大鼠天*氨基轉移酶試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

12 IU/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

6 IU/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

3 IU/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5 IU/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

0.75 IU/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液:大鼠天*氨基轉移酶將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

大鼠天*氨基轉移酶操作程序總結:

1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

3.洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內度OD值

7.計算

計算

大鼠天*氨基轉移酶以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

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