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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：521發(fā)布時(shí)間：2010-06-08
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人顆粒酶-B酶點(diǎn)檢測(cè)
酶點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)是zui近幾年發(fā)展起來應(yīng)用于抗病毒免疫和抗腫瘤免疫的一種新型測(cè)定方法。
Sanquin 提供的顆粒酶-B酶點(diǎn)檢測(cè)試劑盒應(yīng)用技術(shù)，靈敏度高，僅一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞即可測(cè)到存在的顆粒酶-B。特異性強(qiáng)，結(jié)果重復(fù)性好。為抗病毒和抗腫瘤研究提供新型強(qiáng)有力的檢測(cè)工具。
酶點(diǎn)技術(shù)與酶標(biāo)技術(shù)比較
1、酶點(diǎn)技術(shù)明顯的特點(diǎn)是靈敏度增加
2、酶點(diǎn)技術(shù)僅需要1 個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞 / 孔即可,靈敏度達(dá)到1 :1,000,000的陽(yáng)性準(zhǔn)確分析
3、酶標(biāo)技術(shù)需要至少要有400 細(xì)胞 / 孔才可達(dá)到有意義的檢測(cè)水平
4、能在單細(xì)胞水平上分析產(chǎn)生細(xì)胞因子的T細(xì)胞
顆粒酶-B介紹
顆粒酶是外切*蛋白酶，來自細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTLs）和自然殺傷細(xì)胞（NK）釋放的細(xì)胞漿顆粒。這些顆粒含有顆粒酶原及其它蛋白酶原，包括穿孔蛋白。由于CTL細(xì)胞與靶細(xì)胞結(jié)合（經(jīng)CTL受體和靶細(xì)胞表面的抗原肽-MHCⅠ類分子復(fù)合物結(jié)合），通過顆粒的胞吐過程，顆粒酶進(jìn)入了靶細(xì)胞，穿孔蛋白在細(xì)胞膜聚合而進(jìn)入靶細(xì)胞形成跨膜的小孔，使靶細(xì)胞膜穿孔。穿孔蛋白通過使粒酶-內(nèi)體膜穿孔釋放出粒酶。顆粒酶B激活了細(xì)胞內(nèi)caspases反應(yīng), zui后引起靶細(xì)胞的死亡. 顆粒酶A也能誘發(fā)靶細(xì)胞的凋亡。
在許多疾病中，用流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞可測(cè)定顆粒酶B陽(yáng)性的CTL百分比。 部分顆粒酶也可 “漏”入外周血液和其它體液。 在健康者體內(nèi)也可測(cè)得顆粒酶。.這些可溶性的顆粒酶可以用ELISA測(cè)定。
PeliSPOT人顆粒酶 B 試劑盒用于重復(fù)性 特異性定量測(cè)定人CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌釋放的顆粒酶B頻數(shù)。
方法
細(xì)胞孵育在預(yù)包被的微孔板內(nèi)過夜，微孔內(nèi)有預(yù)包被的高親和力抗顆粒酶-B單克隆抗體。分泌的顆粒酶-B與預(yù)包被的抗顆粒酶-B抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的成分，然后加入*標(biāo)記的抗顆粒酶-B抗體。分別加鏈霉親和素—HRP 聚合物和底物，存在分泌的細(xì)胞因子處可見有藍(lán)色/ 紫色的斑點(diǎn)。
顆粒酶-B臨床意義
病毒感染 EBV, HIV, CMV, 肝炎病毒和登革熱病毒感染可增強(qiáng)患者CTL反應(yīng)，體內(nèi)可溶性顆粒酶含量增加。
淋巴瘤和肉瘤 何杰金病等淋巴瘤患者顆粒酶B濃度增高。
風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 可溶性顆粒酶B 在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑液中比原發(fā)性全身性骨關(guān)節(jié)病明顯升高。
移植 顆粒酶涉及腎臟移植后的急性排斥。浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞強(qiáng)烈表達(dá)血漿可溶性顆粒酶, 腎移植病人血漿可溶性顆粒酶水平升高提示系統(tǒng)性病毒感染, 如CMV 感染
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