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上海酶聯生物研究所
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閱讀：437發布時間：2011-06-01
上海酶聯生物研究所
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使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中極低密度脂蛋白（VLDL）含量。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
| 120μg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 60μg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 30μg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 15μg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 7.5μg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結：
1.準備試劑，樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品，
3.洗板5次，加入酶標試劑，
4.洗板5次，加入顯色液A、B，
5.加入終止液
6.15分鐘之內度OD值
7.計算
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
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