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上海酶聯(lián)生物研究所


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96T 鴨子碳酸酐酶 ( (( (CA) )) )酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

閱讀:267發(fā)布時(shí)間:2012-6-18

 鴨子碳酸酐酶 ( (( (CA) )) )酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說(shuō)明書 盒使用說(shuō)明書 盒使用說(shuō)明書 盒使用說(shuō)明書     
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍: :: :                                                                                                                    96T
6U/L -200 U/L
 
使用目的 使用目的 使用目的 使用目的: :: :
本試劑盒用于測(cè)定鴨子血清、血漿及相關(guān)液體樣本中碳酸酐酶(CA)含量。
實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中鴨子碳酸酐酶(CA)水平。用純化的鴨子碳酸
酐酶(CA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入碳酸酐酶(CA),
再與 HRP 標(biāo)記的碳酸酐酶(CA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗
滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的碳酸酐酶(CA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定
吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中鴨子碳酸酐酶(CA)濃度。  
試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品(400 U/L)  0.5ml×1 瓶 
 鴨子碳酸酐酶 ( (( (CA) )) )酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說(shuō)明書3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說(shuō)明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑 B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本 標(biāo)本 標(biāo)本 標(biāo)本要求 要求 要求 要求  
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
200U/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100U/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50U/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25U/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5U/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
 
 
 鴨子碳酸酐酶 ( (( (CA) )) )酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說(shuō)明書2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。      
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同 3。
8.  洗滌:操作同 5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.  測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié): :: :
 
 
計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算 計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。  
注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月 
  多聚ADP核糖聚合酶 PARPELISA試劑盒
 葡萄糖激酶 GCKELISA試劑盒
 單胺氧化酶 MAOELISA試劑盒
 胞漿型磷脂酶A2 cPLA2ELISA試劑盒
 二胺氧化酶 DAOELISA試劑盒
 環(huán)加氧酶2 COX-2ELISA試劑盒
 周期素依賴性激酶5 CDK5ELISA試劑盒
 *10 KLK 10ELISA試劑盒
 磷酯酶Cγ鏈 PLCγ1ELISA試劑盒
 神經(jīng)氨酸酶 NAELISA試劑盒
 磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C PIPLCELISA試劑盒
 磷酯酶C PLCELISA試劑盒
 *激酶2 Tyk-2ELISA試劑盒
 


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