1. 配制培養基時*和hepes添加量之間沒有必然的。*是必須加的，與培養箱內的二氧化碳（溶解在液體內就是碳酸）形成碳酸緩沖對。而HEPES是兩性有機緩沖劑（既可以緩沖酸也可以緩沖堿），其緩沖能力大大高于碳酸緩沖液。
因此，*應該按照說明書的劑量加，HEPES作為輔助緩沖，其用量為10-25mmol/L。
2. 培養液的量是否要考慮添加血清的量？各種觀點都有，但不是滲透壓的因素。可以提高營養成分的濃度（曾有2X、4X氨基酸培養的），但效果也不是很明顯。考慮到現在大多用配好的液體培養液，其配制時并不考慮血清的量，所以還是應該按照1L的量來配。
3. 干粉的zui小包裝必須一次溶解，因為干粉的混合不是均勻的。谷氨酰氨的水溶液不穩定，新配制的不用添加。
另外，培養液溶解后不需調節pH，配方是根據pH7.4組成的，如果溶解后偏堿可以沖入CO2。